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机构用户解决方案

Mighty TA-cloning Kit
品牌 Code No. 包装量 价格 说明书 数量
Takara 6028 20 次 800 元
 
■ 制品内容 (20 次量)
pMD20-T vector (50 ng/μl) 1 μg (20 μl)
Ligation Mighty Mix*1 50 μl × 2
Positive Control Insert*2 10 μl
   
*1: Ligation Mighty Mix与DNA Ligation Kit (Code No.: 6023) 是同一种试剂。
*2: 3’端带有“A”突出端的DNA片段 (约200 bp)。 (以E.coli 基因组DNA为模板,使用TaKaRa Ex Taq 进行PCR反应得到的扩增产物。)(10 ng/μl)
 
■ 制品说明
使用Taq DNA聚合酶进行PCR反应,扩增获得的PCR产物3’端附有一个“A” 碱基。利用3’端附有“A” 碱基的PCR产物进行克隆时,与含有3’-T末端的载体通过T-A碱基互补配对原则进行克隆,此种方法被称为T-A克隆。
Mighty TA-cloning Kit是在短时间内快速地将PCR产物进行T-A克隆的试剂盒。连接反应使用DNA Ligation Kit,操作简便,可在短时间内高效地进行连接反应。
 
保存
-20℃。
 
使用注意事项
1. Ligation Mighty Mix在冰上融解,轻轻混合后再使用。
2. 克隆时,根据插入片段的长度和方向,有时即使插入了DNA片段也会有不出现终止密码或读码框不改变的情况发生,在蓝白选择培养基上会形成淡蓝色菌落。出现这种现象时,建议进行菌落PCR确认插入片段。
3. 进行切胶回收纯化DNA片段时要避免UV照射时间过长。长时间照射,DNA会受到损伤,影响克隆效率。
4. PCR用质粒模板与克隆载体 (pMD20-T vector;具有Ampr) 有同样的选择标记基因时,为防止出现质粒模板自身的转化菌落,将PCR反应液凝胶电泳后回收目的片段,纯化后再进行克隆。
 
 

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