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E.coli HST08 Premium Competent Cells
品牌 Code No. 包装量 价格 说明书 数量
Takara 9128 1 Set (100 μl × 10 支) 397 元
 
■ 制品内容
E.coli HST08 Premium Competent Cells 100 μl × 10
pUC19 plasmid (0.1 ng/μl) 10 μl
SOC medium* 1 ml × 10
*SOC medium:     2%   tryptone
 0.5%   yeast extract
 10 mM   NaCl
 2.5 mM   KCl
  10 mM   MgSO4
10 mM   MgCl2
 20 mM   Glucose
 
■ 制品说明
Takara在Hanahan's method基础上进行了改良,制备出具有很高转化效率的E. coli HST08 Premium Competent Cells。另外,E.coli HST08是mrr, hsdRMS, mcrBC, mcrA (这些基因是大肠杆菌切除外源甲基化DNA所必需的基因) 缺失的菌株,这使得其可广泛应用于甲基化质粒的制备、基因文库的制作以及亚克隆。当和较大质粒一起使用时,也可维持较高转化效率和菌落生长率*。10 kb以上长片段DNA克隆和基因文库构建时,可与TaKaRa DNA Ligation Kit LONG (Code No. : 6024) 一起使用,效果很好。
*:与其他相同基因型的感受态细胞相比较。
对于pUC系列质粒,可通过β-半乳糖苷酶的α-互补性,在培养基中添加X-gal进行蓝白筛选,以筛选阳性克隆。
X-Gal:5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside
 
■ 细胞浓度
1-2×109 bacteria/ml
 
■ Genotype
E. coli HST08 Premium: F-, endA1 , supE44 , thi -1 , recA1 , relA1, gyrA96 , phoA , Φ80d lacZ ΔM15,Δ(lacZYA - argF)U169 , Δ(mrr - hsdRMS - mcrBC), ΔmcrA , λ-
 
■ 保存
-80℃。
注意: 如果不在-80℃下保存,转化效率将会降低。此时,在使用前,请使用附带的pUC19 对照质粒来确认细胞的转化效率。不能液氮保存。
 
■ 质量标准
[1] 转化效率
转入1 ng 的pUC19 plasmid,涂于含有ampicillin的L-plate进行筛选。
转化效率 : >1 x 108 colonies/μg pUC19 plasmid
[2] β-半乳糖苷酶的α-互补性
转化pUC19 DNA时,含有100 μg/ml ampicilin 和 60 μg/ml X-Gal的L-agar plate上出现蓝色菌落。
 
■ 注意事项
1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
2. 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml 圆底 tubes (BD Code: 352059 或 352057,等),但效率可能会降低。
3. 当使用100 μl感受态细胞时,加入不超过10 ng的高纯度DNA样品。否则转化效率会降低。
4. 当改变感受态细胞使用体积或tube类型时,适当调整反应条件。例如,当使用1.5 ml microcentrifuge tubes时,42℃放置60秒而不是45秒。
5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基,转化效率可能会降低。
  ·L-broth:10 g Bacto tryptone, 5 g Bacto yeast extract, 5 g NaCl,用1 N NaOH调整pH到7.5,使体系终体积为1 L,高压灭菌。
  ·φ b-broth:5 g Bacto yeast extract, 20 g Bacto tryptone, 5 g MgSO4·7H2O,用1 N KOH调整pH到7.5,使体系终体积为1 L,高压灭菌。
6. L-plates: 10 g Bacto tryptone, 5 g Bacto yeast extract, 5 g NaCl,用1 N NaOH调整pH到7.5,添加agar到1.5%,使体系终体积为1 L,高压灭菌。
7. 当使用X-Gal 时,按照以下操作进行:
   将20 mg /ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200-300 μl/100 ml 的比例加入到agar 中。
8. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是,如果再次冻结不可避免,将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻,置于-80℃保存。但是,转化效率可能会降低至少一个数量级。
 
 

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