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E.coli HST02 Electro-Cells
品牌 Code No. 包装量 价格 说明书 数量
Takara 9026 1 Set (50 μl × 10 支) 516 元
 
■ 制品内容
E. coli HST02 Electro-Cells 50 μl × 10
pUC19 plasmid (10 pg/μl) 10 μl
SOC medium* 1 ml × 10
*SOC medium:      2%   Bacto tryptone
 0.5%   Bacto yeast extract
 10 mM   NaCl
 2.5 mM   KCl
  10 mM   MgSO4
  10 mM   MgCl2
 20 mM   Glucose
 
■ 制品说明
E. coli HST02 Electro-Cells是Takara Bio特别制备的适用于电穿孔法的制品。用高电压脉冲电流瞬间击穿细胞的细胞质膜,从而使外源DNA转入宿主细胞的转化方法称为电穿孔法。通过此种方法制备的感受态细胞转化效率高、产量大,尤其适合在短时间内将少量样品转入大肠杆菌内。
E. coli HST02宿主mrr-hsdRMS-mcrBC, mcrA缺失,适合于甲基化DNA的克隆。同时含有F’质粒,也可作为M13 phage载体DNA的宿主菌,也可制作基因文库或进行亚克隆。
当转化pUC载体或转染M13噬菌体载体DNA时,重组体可以利用electro-cells的β-半乳糖苷酶的α-互补性,通过添加X-Gal和IPTG很容易地筛选出来。
X-Gal : 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside
IPTG : Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside
 
■ 细胞浓度
>1×1010 bacteria/ml
 
■ Genotype
E. coli HST02:F' [traD36, proA+B+, lac Iq, lacZ△M15]/△(lac-proAB), recA, endA, gyrA96, thi, e14-(mcrA-), supE44, relA, △deoR, △(mrr-hsdRMS-mcrBC)
 
■ 保存
-80℃。
注意:-80℃或更低温度下保存。如果保存温度不能恒定,转化降低将会降低。可使用附带的pUC19 对照质粒来确认保存细胞的转化效率。不能液氮保存。
 
■ 质量标准
转入10 pg 的pUC19,涂于含有Amp+ 的选择培养基进行筛选。
转化效率 : >1 x 109 cfu/μg pUC19 DNA
 
■ 注意事项
1. 将electro-cells从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
2. 当使用50 μl electro-cells时,添加的高纯度样品DNA不多于10 ng。否则会降低转化效率。
3. 当改变实验规模时,适当改变反应条件。
4. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时,效率会降低。
    ·L-broth : Ingredient per liter water  
  Bacto tryptone 10 g  
  Bacto yeast extract 5 g  
  NaCl 5 g  
    用1 N NaOH调整pH7.5左右并高压灭菌。
    ·φ b-broth: Ingredient per liter water  
  Bacto tryptone 20 g  
  Bacto yeast extract 5 g  
  MgSO4·7H2O 5 g  
    用1 N KOH调整pH7.5左右并高压灭菌。
5. 稀释时,使用“使用方法4”中加入的SOC培养基。
6. YT soft agar: Ingredient per 100 ml water  
  Bacto tryptone 0.8 g  
  Bacto yeast extract 0.5 g  
  NaCl 0.5 g  
    用1 N NaOH调整pH7.6左右,添加agar至浓度为0.6%,高压灭菌。当DNA插入M13噬菌体载体克隆位点时,重组体可通过在YT-soft agar添加X-Gal and IPTG而容易被筛选出来。
7. YT-plate: Ingredient per liter water  
  Bacto tryptone 8 g  
  Bacto yeast extract 5 g  
  NaCl 5 g  
    用1 N NaOH调整pH7.6左右,添加agar至浓度为1.5%,高压灭菌。
8. 制备宿主细胞。
9. 当加入X-Gal或IPTG时,按照以下方法操作:
  ·加入100 mM IPTG,比例为100-300 μl/100 ml agar medium,当使用soft agar 时比例为25 μl/3 ml。
  ·将20 mg /ml X-Gal(溶解于二甲基甲酰胺)按200-300 μl/100 ml的比例加入到agar medium中,如果使用soft agar,则比例为 50 μl/3 ml。
10. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是,如果再次冻结不可避免,将细胞置于干冰/乙醇中快速冷冻,置于-80℃保存。但是,转化效率可能会降低至少一个数量级。
 
 

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